Диагностика паразитозов

ДИАГНОСТИКА ПАРАЗИТОЗОВ

Для исследования паразитофауны кишечника детей нами апробированы сочетания разных методов, широко применяющихся в паразитологической практике, и избраны наиболее информативные методы диагностики кишечных паразитов (табл. 4).

В итоге в качестве рабочего метода была выбрана диагностическая система, разработанная в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского, КТ-ФЭО-МЦН (консервант Турдыева (КТ)¹ — формалин-эфирное обогащение — модификация Циля — Нильсена). Метод доступен, экономичен и информативен, так как позволяет выявлять в единой пробе трофозоиты, цисты, ооцисты простейших, яйца и личинки гельминтов. В КТ трофозоиты и цисты простейших сохраняют морфологию и блеск, присущие им в свежем состоянии. Кроме того, простейшие в консерванте окрашиваются как в мазке с раствором Люголя, что сохраняет стереотип восприятия и облегчает работу лаборанта. Отсутствие спирта в составе КТ дает возможность продолжительного микроскопирования мазка. Обогащение взвеси фекалий из консервирующей жидкости формалин-эфирным методом позволяет, не нарушая структуры объектов, выявлять паразитов даже при незначительном содержании их в фекалиях. Все это исключительно важно при массовых паразитологических исследованиях.

Сущность комплексного метода заключается в следующем: фекалии трехкратно собирают в пенициллиновый флакон с 5-6 мл КТ. Сбор проводится в течение 3 дней при ежедневном стуле, при склонности к запорам интервал сбора материала увеличивается. Рекомендуемый объем фекалий с каждого стула — горошина. Соотношение суммарного объема, трехкратно собранного материала (с лесной орех) и КТ — 1: 3. Флакон с консервирующей жидкостью при добавлении очередной порции фекалий встряхивают до получения гомогенной взвеси.

Метод КТ. Доставленный в лабораторию флакон с фекалиями при необходимости снова тщательно встряхивают, суспензию отстаивают. Затем осторожно глазной пипеткой со дна флакона берут осадок для приготовления двух и более препаратов с раствором Люголя и изучают под микроскопом при увеличении: окуляр х 10, объектив х 8, затем объектив х 40.

Метод КТ-ФЭО. Собранные во флакон с КТ фекалии тщательно перемешивают и фильтруют через один слой марли в мерную центрифужную пробирку. К 4-4,5 мл фильтрата добавляют до 8 мл 10 % формалина и 2 мл эфира. Пробирку закрывают пробкой (от пенициллинового флакона) и энергично встряхивают. После центрифугирования в течение 3 мин при 1500 об/мин палочкой осторожно отделяют от стенок пробирки образовавшуюся фекальную пробку и содержимое выливают, перевернув пробирку вверх дном. Излишки влаги со стенок пробирки удаляют ватным тампоном. Из осадка на дне пробирки готовят два и более препаратов, окрашенных раствором Люголя, и микроскопируют при увеличении: окуляр х 10, объектив х 8, затем объектив х 40.

Метод КТ-ФЭО-МЦН. Дополнен модифицированным методом Циля—Нильсена для определения ооцист криптоспо-ридий в фекалиях. Обогащенный осадок, оставшийся на дне пробирки, переносят на предметное стекло и круговыми движениями готовят мазок. После тщательного высушивания мазок фиксируют 20-30 мин в смеси Никифорова. Снова высушивают, окрашивают 45 мин раствором карболового фуксина (наливают краску на стекло) и промывают проточной водой. Обесцвечивают 20 с— 1 мин в 10 % растворе серной кислоты (до прекращения отхождения розовых облачков). Тщательно промывают проточной водой. Окрашивают 5 % раствором малахитового зеленого в 10 % этиловом спирте. Ополаскивают проточной водой, высушивают на воздухе и просматривают под микроскопом. Увеличение: окуляр х 10, объектив х 90 с масляной иммерсией.

Для диагностики энтеробиоза рекомендуется специальный метод липкой ленты, это позволяет уменьшить долю ложноотрицательных результатов. На каждого ребенка вместе с флаконом с КТ выдается 2-3 стекла с липкой лентой. Отпечатки с перианальных складок рекомендуется делать до утреннего туалета (пока ребенок находится в постели) с периодичностью в 1-2 дня.

В последние годы все шире используется метод выявления антител к антигенам Т. cam's с использованием имму-ноферментной системы АО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Обследование детей проводилось нами только по показаниям с учетом клинических признаков, эпиданамнеза и данных о содержании эозинофилов в крови обследуемых.

Одним из современных методов, обладающих высоким диагностическим потенциалом, является метод копроимму-нодиагностики лямблиоза, который выявляет в водных экстрактах фекалий специфический антиген лямблий GSA-65. (Мы работали с тест-системой ProSpecT Giardia Microplate Assay, Alexon, USA.) Этот копроантиген представляет собой молекулу гликопротеина с молекулярным весом 65,00, продуцируемого простейшим в кишечнике хозяина.

Копроантиген выявляется тест-системой как в «немые периоды» (когда численность паразитов в кишечнике ниже порога паразитологического метода), так и в прелатентный период. Это обеспечивает раннюю диагностику лямблиоза и снижает долю ложноотрицательных результатов. После удаления паразита антиген GSA-65 исчезает в течение 2 недель. Эффективность метода высокая: чувствительность и специфичность — 98 %.

-----
¹ Консервант Турдыева: 0,2 % водный раствор нитрита натрия — 80 мл, раствор Люголя (к1-4, 1-2) — 8 мл, формалин концентрированный — 10 мл, глицерин — 2 мл.